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羅氏LightCycler 480 II 384孔熒光定量PCR儀由瑞士羅氏診斷公司(Roche Diagnostics)研發生產。該儀器屬于德國原裝進口的高端精密設備,其核心部件(如銀質熱模塊、光學棱鏡系統)在德國曼海姆工廠制造,代表了羅氏在分子診斷和生命科學研究領域的工藝水準。作為羅氏LightCycler系列的第二代旗艦產品,它繼承了該系列在臨床驗證和科研穩定性方面的深厚基因。
該儀器的核心功能是實現高通量、高精度的實時熒光定量PCR(qPCR)檢測。具體包括:1)絕對定量與相對定量:通過標準曲線法或ΔΔCt法精確計算DNA/RNA的起始拷貝數,動態范圍高達11個數量級;2)高分辨率熔解曲線(HRM)分析:無需探針即可進行基因分型、突變掃描和SNP檢測,分辨率可達0.01℃;3)多重PCR檢測:利用其6個獨立光學通道,可在單孔內同時檢測多達6種不同的靶標(如FAM、VIC、CY5等染料);4)終點法基因分型:適用于TaqMan探針或雜交探針的終點讀取。
Therma-Base?熱循環技術:采用一體成型的純銀加熱模塊,結合的氣液平衡導熱層,徹底消除了傳統PCR儀的“邊緣效應”,確保384個孔在任意時間點的溫度均一性達到±0.1℃,這是獲得高重復性數據(CV<0.3%)的物理基礎。
全固定光路與冷CCD檢測:采用高強度白色LED固態光源(壽命>10,000小時)和五棱鏡長光路設計,無需移動任何機械部件即可同時激發并采集整板所有孔的信號,消除了孔間時間差。檢測器采用制冷型CCD(工作溫度≤10℃),有效降低光子噪聲,無需依賴ROX被動參比染料進行孔間校正。
極速升降溫:模塊最大升溫速度可達6.8℃/秒,樣本平均升溫速度達4.8℃/秒,使得完成40個循環的384孔PCR反應時間縮短至40分鐘以內,大幅提升篩選效率。
模塊化互換:用戶可在5分鐘內自行更換96孔或384孔熱模塊,無需工程師校準,且軟件自動識別模塊類型,實現了通量的靈活切換。
該儀器主要應用于對數據準確性和通量有極高要求的場景:1)藥物研發與生物制藥:細胞系開發中的基因表達分析、病毒載體滴度測定(如AAV、慢病毒)、工藝驗證中的殘留DNA檢測;2)臨床前研究與轉化醫學:大規模生物標志物篩選、伴隨診斷開發、液體活檢中的ctDNA定量;3)基礎科研:基因表達譜分析、MicroRNA研究、DNA甲基化分析、病原體高通量篩查;4)農業與食品安全:轉基因成分定量、食源性致病菌快速檢測。
(此處應插入羅氏LightCycler 480 II 384孔儀器的正面外觀圖,特征為:銀灰色金屬機身,正面中央有一個帶雙向箭頭的圓形按鈕用于進板,右側通常連接一臺工業級電腦顯示器,儀器側面貼有“LightCycler 480 II”型號標簽。)
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參數類別 |
詳細指標 |
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型號名稱 |
LightCycler 480 Instrument II (384-well) |
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樣品通量 |
384孔(兼容96孔模塊,需另購) |
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反應體積 |
384孔板:3 μL - 20 μL;96孔板:10 μL - 100 μL |
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溫控系統 |
Peltier半導體溫控,銀質模塊 |
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溫度范圍 |
37℃ - 99℃ |
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溫度準確性 |
≤ ±0.1℃ (37-99℃) |
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溫度均一性 |
≤ ±0.1℃ (任意時間點) |
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升溫速度 |
模塊最大:≥6.8 ℃/s;樣本平均:≥4.8 ℃/s |
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降溫速度 |
模塊最大:≥4.4 ℃/s |
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光學系統 |
高強度白色LED固態光源,冷CCD檢測器 |
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激發波長 |
390-710 nm(連續光譜),5個激發濾光片 |
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檢測通道 |
6個獨立檢測通道(可自由組合達20種模式) |
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檢測模式 |
SYBR Green I, TaqMan, Hybridization Probe, SimpleProbe, FRET |
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HRM分辨率 |
≤ 0.01℃ |
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動態范圍 |
11個數量級(1 - 10^10 copies) |
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運行時間 |
40個循環(384孔)< 40分鐘 |
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數據采集 |
全板同時采集,無孔間時間差 |
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軟件平臺 |
LightCycler 480 Software (Version 1.5或更高) |
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物理尺寸 |
約 60 cm (W) × 60 cm (D) × 54.5 cm (H) |
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重量 |
約 55 kg |
耗材兼容性:必須使用羅氏原廠或認證的無裙邊/半裙邊矮板(如Roche Cat# 04729749001)。嚴禁使用高裙邊板或厚底板,否則會卡住機械臂或導致光學焦距不準。
封膜要求:必須使用光學級透明封板膜(如Roche LightCycler 480 Sealing Foil),且封膜時需確保無褶皺、無氣泡。裸手或戴粉狀手套接觸膜面會導致熒光淬滅或背景升高。
環境溫度:儀器工作環境需維持在15℃ - 32℃,濕度20%-80%。環境溫度過高會導致Peltier冷卻效率下降,儀器報錯“Over Temperature”。
清潔維護:定期用無水乙醇擦拭進板軌道和模塊表面。嚴禁使用強腐蝕性溶劑(如次氯酸鈉)直接沖洗模塊,會導致銀質表面腐蝕和熱電偶損壞。
軟件合規:若用于GLP/GMP環境,需購買并激活“21 CFR Part 11”合規軟件模塊,否則默認研究版軟件不具備完整的審計追蹤(Audit Trail)功能。
適用場景決策:
必選場景:實驗室日均樣本量超過500個,且需要進行HRM分析或復雜多重檢測(如5-6色)。LightCycler 480 II的溫控均一性是HRM數據的“金標準”。
慎選場景:如果實驗室主要做簡單的SYBR Green表達量檢測,且樣本量少(<96孔/天),建議購買LightCycler 96或更經濟的品牌,因為480 II的耗材(384孔板)成本和維護成本較高。
升級建議:若已擁有老款LightCycler 480(I代),升級至II代主要獲益于白色LED光源(免維護)和更快的運行速度,對于通量瓶頸實驗室是值得的。
配置選擇:基礎套餐通常包含384孔模塊。如果實驗室同時有低通量摸索實驗,強烈建議加購96孔模塊(貨號:05015243001),實現“一機兩用”。對于自動化流水線用戶,需確認是否選配“Automation Kit”以兼容機械臂。
羅氏LightCycler 480 II屬于高端定價策略,全新機市場參考價格區間為人民幣80萬元至150萬元。
基礎版(約80萬-100萬):僅包含384孔模塊、基礎軟件和研究版授權。
全配版(約120萬-150萬):包含96孔+384孔雙模塊、21 CFR Part 11合規軟件、自動化接口套件、以及首年白金服務合同。
影響因素:價格受匯率、關稅、代理商層級(一級代理 vs 二級)影響大。政府采購或高校集采通常能拿到較低折扣。二手市場(8-10年機齡)價格約為20萬-40萬,但需警惕光源衰減(>15000小時)和模塊老化風險。
保修政策:全新機標準整機保修期為1年。保修范圍涵蓋所有硬件故障(包括光源、CCD、主板、熱模塊)。注意:軟件Bug修復和技術支持電話通常終身免費,但硬件過保后維修費用極高(如更換熱模塊約10萬-15萬元)。
服務合同(Service Contract):強烈建議購買年度預防性維護(PM)合同。羅氏提供銀牌(每年1次上門PM)、(每年2次PM+4小時響應)等級別。年費約為設備購置價的8%-12%。合同期內提供免費校準、性能認證(IQ/OQ/PQ)和備件優先更換。
技術支持:提供7x24小時熱線支持。羅氏擁有專門的qPCR應用科學家團隊,可提供免費的上機培訓(通常在新機安裝時)和定期的高級應用講座(如HRM實驗設計)。
(此處應附上《LightCycler 480 Operator's Manual》或《Quick Start Guide》的封面截圖。該說明書通常為PDF格式,超過200頁,包含詳細的硬件介紹、軟件操作流程圖、故障代碼查詢表以及維護日程表。關鍵章節包括:“Loading the Sample Plate”、“Creating a New Protocol”、“Analysis of Melting Curves”。)
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